| 用途
本试剂盒用于体外定量检测大鼠 血清、血浆、或其他生物液中 (25(OH) D)浓度。
| 实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠 25 羟基维生素 D(25(OH)D)水平。用纯化的大鼠 25 羟基维生素 D(25(OH)D)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 25 羟基维生素 D(25(OH)D)，再与 HRP 标记的 25 羟基维生素 D(25(OH)D)抗体结 合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 25 羟基 维生素 D(25(OH)D)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准 曲线计算样品中大鼠 25 羟基维生素 D(25(OH)D)浓度。
| 基本性能
性能 | |
灵敏度 | 0.15ng/mL |
检测范围 |
0.6ng/ml - 20ng/ml |
特异性 | 可检测样本中的大鼠25(OH)D，且与其他类似物无明显交叉反应 |
重复性 | 板内，板间变异系数均《10% |
| 试剂盒组份及储存
中文名称 | 规格 | 开封后保存条件 |
ELISA 酶标板 | 96T : 8 孔×12 条 48T : 8 孔×6 条 | 2-8℃ 90天 |
标准品 | 96T : 0.5ml x1 (40ng/mL) 48T : 0.25mlx1 | 2-8℃ 90天 |
HRP标记抗体 | 96T : 6mlx1 48T : 3mlx1 | 2-8℃ 90天 |
样品稀释液 | 96T : 1.5mlx1 48T : 1mlx1 | 2-8℃ 180天 |
标准品稀释液 | 96T : 6mlx1 48T : 3mlx1 | 2-8℃ 180天 |
显色剂A | 96T : 6mlx1 48T : 3mlx1 | 2-8℃(避光） 180天 |
显色剂B | 96T : 6mlx1 48T : 3mlx1 | 2-8℃(避光） 180天 |
终止液 | 96T : 6mlx1 48T : 3mlx1 | 2-8℃ 180天 180天 |
30倍浓缩洗涤液 | 96T : 20mlx1 48T : 10mlx1 | 2-8℃ 180天 180天 |
说明书 | 1份 | |
质检报告 | 1份 | |
密封袋 | 1个 |
说明；未拆封的试剂盒可以在2-8℃ 保存六个月.
| 试剂盒所需自备物品。
1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3.37℃恒温箱
4. 双蒸水或去离子水
5. 吸水纸
6. 加样槽
| 样品收集方法（具体处理方法请咨询）
1. 血清：用无菌管收集，室温血液自然凝固10-20分钟，2-8℃条件离心20分钟左右 （2000-3000转/分）仔细收集上清，保存过程中 如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
4. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将剪碎的组织与 对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适 当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步 裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g 离心5-10分钟取 上清检测。
5. 细胞提取液：贴壁 细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞。悬浮 细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200 μL PBS重悬(推荐在PBS 中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清检测。
6. 细胞培养上清或其他生物体液；收集液体后于2-8℃，1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片，取上清检测。
| 试剂盒注意事项
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品 稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（n×5)
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
